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RAW264.7+GFP小鼠單核巨噬細胞白血病細胞綠色熒光標記

,RAW264.7 GFP

貨號：YJ-0082a

價格： 3200.0

規格： 1*10 ⁶

細胞描述

此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶GFP基因。

細胞特性

1） 來源：鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞

2） 形態：不規則圓形，紡錘狀，貼壁細胞，少量懸浮。

3） 含量：>1x106  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為穩定轉染GFP的細胞，隨細胞傳代次數的增加，其GFP熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。

建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養基維持培養，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養基繼續篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養基培養，至細胞密度約80%，可繼續加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養基正常培養。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3）半貼細胞或貼壁不牢（懸浮）細胞：T25瓶置于37℃培養箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完全培養基重懸后打回到原培養瓶中繼續培養，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養基中懸浮的細胞離心后回收。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。

細胞培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備

1） 準備DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺，0.11g / L丙酮酸鈉) (推薦YJ-0001)培養基；優質胎牛血清10 %；P/S青霉素-鏈霉素 1%。

2） 注意事項：

（a）在細胞生長的初始階段，細胞以貼壁的形式生長并呈現出長方體的形態和有“偽足"延伸。隨著培養時間的增加，細胞呈現圓形并以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度，會有細胞以懸浮的方式散落到到培養基中，鏡下觀察會發現懸浮和貼壁的細胞會同時出現。

（b）該細胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時，用無菌細胞刮刮拭培養表面將細胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養瓶中。（c）該細胞形態上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時應收集起來，離心后細胞沉淀可以繼續培養。

（d）血清質量差異可能引起細胞貼壁能力變化，應選用高質量的胎牛血清。

3） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

4） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理

1）凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養。

該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

該細胞用細胞刮鏟替代胰酶來對細胞進行處理。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養表面將細胞刮落，收集細胞后離心去上清，重懸后接種到新的裝有新鮮培養液的培養瓶內。收貨后第一次傳代1:2進行，后續可以根據實際的情況以1:2~1:4的比例進行傳代。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

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